D-Luciferin Firefly, Free Acid D-螢火蟲熒光素（游離酸）

搜索關鍵詞：

D-熒光素（D-Luciferin）；Luc報告基因底物；螢火蟲熒光素酶Firefly luciferase；D-熒光素鉀鹽；D-熒光素鈉鹽；生物發光成像技術（Bioluminescence imaging，BLI）；Luminometer熒光計；CAS NO：2591-17-5；

基本描述：

D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術領域，特別是體內活體成像技術。作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，D-熒光素（底物）被氧化發光。當熒光素過量時，產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質粒轉染進入細胞后，導入研究動物如大小鼠體內，之后注入熒光素，通過生物發光成像技術（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據生物發光強度的變化來指示能量或生命體征。

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前市場上有三種產品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素（鈉鹽），和D-熒光素（鉀鹽）。這三種產品主要差別在于溶解特性。D-熒光素（游離酸）在水以及緩沖體系內的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內實驗。配成溶液后的三種產品，在絕大多數應用上都沒有實質性的差別。

基本特性：

1）  CAS NO：2591-17-5

2）  化學名：(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid; D-Luciferin Firefly, free acid D-螢火蟲熒光素游離酸，D-甲蟲熒光素游離酸；

3）  分子式：C11H8N2O3S2

4）  分子量：280.32 g/mol

5）  純度：＞99% (HPLC)

6）  外觀：類白色至淺黃色粉末

7）  溶解性：溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50mg/ml），溶于弱堿，微溶于水

8）  化學結構圖：

注意事項

1）螢火蟲熒光素（firefly luciferin）和甲蟲熒光素（beetle luciferin）皆相同化合物，即：(S)-2-(6-Hydroxy-2- benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylic acid，僅不同公司在命名上的差異。

2）螢火蟲熒光素（firefly luciferin）在保存和操作的過程中需要避光。另，水溶性儲存液經過濾除菌后，可置于-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復凍融。若條件允許，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩定性和保存時間更長，長達1年。

3）螢火蟲熒光素（firefly luciferin）的注射方式，以及動物類型、體重等都會影響熒光信號發射，建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定zuijia信號平臺期和zuijia檢測時間。

4）紫外線和潮氣會產生脫氫熒光素，是一種熒光素酶的競爭性抑制劑。因此需小心保存和處理D-熒光素。-20℃避光干燥保存。

5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

A．體外生物發光檢測

1. 儲存液制備

【注意】：建議大量實驗前先取少量原料（D-熒光素游離酸）溶于你的緩沖液，以測試其溶解性。

【配置方法】：要溶解螢火蟲熒光素游離酸到生理鹽中，首先用NaOH或KOH調整緩沖液到預測的摩爾堿度，然后加入D-熒光素游離酸（如15mg/ml），邊攪拌邊促進溶解。如果仍有沉淀，調整pH到更高直至*溶解。zui后用酸調整pH到所需值。混勻后立即使用或分裝于-80℃避光凍存，避免反復凍融。

2. 熒光素酶反應緩沖液制備

2.1 配方【1×，參考Yuichi Oba, et al., 2003】：100mM Tris-HCl（pH 7.8），5mM MgCl2，250µM CoA，150µM ATP。具體緩沖液組成可參考其他文獻資料來調整。按照以上配方制備熒光素酶反應緩沖液（2×）。

3. 收集細胞裂解上清（熒光素酶表達）

根據需要檢測的細胞類型，選擇合適的裂解液進行細胞裂解，離心收集上清后續檢測待用。

4. 螢火蟲熒光信號檢測

【注①】：螢火蟲熒光信號的檢測方法大體上取決于冷光測定儀（luminometer）類型（是手動型熒光計、單管注射型或者酶標板讀數型熒光計）。根據特定發光測定儀，來考慮注射用量和程序設置。

【注②】：需設置不含熒光素酶的孔（用作陰性對照），以測定背景熒光。

例：注射式冷光測定儀（injectible luminometer，單樣或微孔板，200µl終體積）

a）吸取100µl熒光素酶反應緩沖液（2×）到一干凈的冷光測定儀比色皿或96孔板的各孔（使用全白平底的96孔板）；

b）吸取50~98µl裂解上清到皿或孔內；

c）如果有需要，用水來補足使得總體積到198µl；

d）設置程序注射2µl熒光素儲存液（使工作濃度150µg/ml），程序：2~5秒延遲（delay），之后10s測定。

B．活體成像分析

1）工作液準備：準備少量的PBS（w/o Mg2+）, pH=12以及PBS（w/o Mg2+）, pH=2緩沖液。先取10mg D-熒光素游離酸到165ml PBS（w/o Mg2+）, pH=12，充分溶解后，再加入165ml PBS（w/o Mg2+）, pH=2中和溶液，混勻得到30mg/ml的工作液。0.2µm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-80℃避光凍存，避免反復凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

2）注射方式：適用于靜脈注射，腹腔注射，肌肉注射和鼻內注射等，根據具體方式調整注射體積，zui常用的注射濃度為150mg/kg體重。

3）檢測方式：注射入體內10-20 min（待光信號達到zui強穩定平臺期），再進行成像分析。

【注意】：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定zui高信號檢測時間和信號平臺期。

相關產品：

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

D-Luciferin Firefly Free Acid D-熒光素游離酸 熒光探針與細胞染色

D-Luciferin Firefly Free Acid D-熒光素游離酸 熒光探針與細胞染色