Benzonase Nuclease 核酸酶/廣譜核酸酶
（酵母重組表達，無細菌內(nèi)毒素殘留，無蛋白酶污染）
產(chǎn)品關鍵詞：
Benzonase Nuclease 核酸酶（廣譜核酸酶）；粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen）；非特異性核酸內(nèi)切酶；RIPA裂解液；DNA/RNA降解；CAS：9025-65-4；
基本描述：
Benzonase，中文名核酸酶，或廣譜核酸酶，一種源于粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又稱為靈桿菌）的非特異性核酸內(nèi)切酶，由兩個*一樣的亞基構成，每個亞基大約30kDa，含有245個氨基酸和兩個必需的二硫鍵。可以切割和降解各種形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環(huán)狀，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5個寡核苷酸殘基片段，并且在很多種操作條件下有效。對核酸堿基序列無特異性要求，可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進行切割，廣泛用于去除生物制品中的核酸。
主要應用：
1、科研研究中，作為培養(yǎng)細胞上清和細胞裂解液去粘度的酶制劑，去除核酸干擾提高后續(xù)蛋白純化
或功能研究；
2、用在生化分析樣品制備——ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程，使用本品benonase處理
含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，以及提高回收率。
3、疫苗工業(yè)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)，去除宿主核酸殘留，使得疫苗和蛋白類核酸污染顯著降低至皮克
級別，提供生物功效。
4、防止細胞凝聚（Cell clumping），特別是融化凍存的細胞樣品時；
應用優(yōu)勢：Benonase不僅無蛋白酶活性，而且不會對健康細胞的生長造成干擾。應用背景：全血來源的外周血單個核細胞（PBMCs）在疫苗研究中具有重要的應用價值，比如，定量疫苗誘導的T細胞反應。T細胞反應實驗zui初要求新鮮分離的細胞從而達到zuijia的檢測信號，這給大規(guī)模的實驗中對樣本處理提出嚴格的操作限制。然而，凍存PBMCs（尤其是從凍存血液中分離出的PBMCs）一旦融化非常容易聚集到一起，影響后續(xù)的分析。
應用示例：Smith JG et al.研究顯示Benonase（≥50 U/ml）加入PBMC融化緩沖液中有效預防細胞凝聚，從而使得PBMC冷凍保存的應用成為可能。【文獻來源：Smith JG et al. Development and validation of a gamma interferon ELISPOT assay for quantitation of cellular immune responses to varicella-zoster virus. Clin Diagn Lab Immunol. 2001 Sep;8(5):871-9.】
Fig. 2. Comparison of results with frozen PBMCs isolated from freshly collected blood versus blood stored overnight (4°C). SFC represent the adjusted VZV ELISPOT response, i.e., the mean response to VZV antigen for replicate wells minus the mean response to MRC-5 control antigen for replicate wells.
產(chǎn)品優(yōu)勢：
1. 酵母重組表達，無細菌內(nèi)毒素殘留。【大部分商業(yè)化的Benonase都是大腸桿菌重組表達，由于自身菌株特性，不管純化方法如何，或多或少都會受細菌內(nèi)毒素影響。】
2. 無蛋白酶殘留，不會對蛋白本身造成干擾，影響測試結果準確性。
3. 比活力高≥1.0×106 U/mg蛋白【活性單位定義：在37℃，pH8.0反應條件，2.625ml反應體系中，30min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0（相當于*消化37μg 鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）】
4. 提供兩種純度的產(chǎn)品：≥ 90%（SDS-PAGE），以及≥ 99%（SDS-PAGE），前者滿足zui基本的科研應用，價格更經(jīng)濟實惠；后者滿足生物制品要求。
5. 酶活性值：≥250 U/μL。對于小體積制備物，可用稀釋緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl稀釋到一定濃度，再加入體系中。稀釋后溶液可4℃保存幾天維持穩(wěn)定。
6. 液體酶形式提供，使用更方便。直接加入裂解液共同使用即可。
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | CAS NO. | 價格（元） | 貨期 |
MP1509-25KU | Benzonase Nuclease 核酸酶 | 25KU | 9025-65-4 | 400 | 現(xiàn)貨 |
MP1509-50KU | Benzonase Nuclease 核酸酶 | 50KU | 9025-65-4 | 720 | 現(xiàn)貨 |
MP1509-100KU | Benzonase Nuclease 核酸酶 | 100KU | 9025-65-4 | 1380 | 現(xiàn)貨 |
常見問題（FAQs）：
問1：在實驗的哪一步加入Benzonase核酸酶？ 答1：根據(jù)具體應用有所變化，但是總的原則是，在發(fā)酵步驟之后和蛋白收集之前加入Benzonase。 | |||||||||||||||||||||||||||
問2：如何稀釋 Benzonase核酸酶？ 答2：一般建議按照1:1000-1:20000來稀釋，具體根據(jù)實際應用濃度、反應體系、反應溫度、作用時間等參數(shù)來靈活變動。使用稀釋緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl來稀釋，4℃保存幾天穩(wěn)定。現(xiàn)配現(xiàn)用。或使用貯存緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl, 50%甘油來稀釋到一個中間濃度，-20℃保存長期穩(wěn)定。 | |||||||||||||||||||||||||||
問3：Benzonase核酸酶是否無蛋白酶活性？ 答3：本品未檢測到蛋白酶活性，因此使用過程中不會被降解。但是樣品自身含有的蛋白酶可能會對本品造成不可逆的降解。 | |||||||||||||||||||||||||||
問4：Benzonase核酸酶是否安全？ 答4：內(nèi)部毒性測試數(shù)據(jù)，單次注射小鼠和大鼠：發(fā)現(xiàn)在很高濃度下都沒有毒性效應。另，*濃度靜脈注射小鼠未觀察到致突變性。 | |||||||||||||||||||||||||||
問5：為什么Benzonase核酸酶不工作？什么會抑制其活性？ 答5：在寬廣的作用條件下Benzonase都具有活性【見下表】，然而，1-2mM Mg2+對酶活性維持是十分必要的。Mn2+可替代Mg2+，但Benzonase只有在Mg2+存在下才能達到zuijia工作活性。當單價陽離子濃度＞300mM，磷酸鹽濃度＞100mM，硫酸銨濃度＞100mM的情況下，酶活性被抑制約50%。另外，＞1mM EDTA也會抑制酶活性。
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問6：發(fā)現(xiàn)Benzonase核酸酶活性喪失，為什么？ 答6：Benzonase通常很穩(wěn)定，但是某些情況會發(fā)生活力損失。有幾種可能原因：由于樣品中變性劑比如蛋白酶的存在或不正確保存方法引起的不可逆酶活性喪失；由于螯合劑如EDTA存在引起可逆失活，因其去除維持酶活必須的Mg2+。 | |||||||||||||||||||||||||||
問7：一不小心將Benzonase核酸酶置于工作臺上整周，是否能繼續(xù)使用？ 答7：Benzonase穩(wěn)定性測試顯示其十分穩(wěn)定。25°C（濕度60%）保存數(shù)周酶活性不受影響。 | |||||||||||||||||||||||||||
問8：如何抑制Benzonase核酸酶活性？ 答8：操作體系中添加劑/試劑都有可能影響Benzonase活性——比如，高鹽（單價陽離子濃度＞300mM，磷酸鹽濃度＞100mM，硫酸銨濃度＞100mM）。其他已知抑制劑如螯合劑EDTA，導致Mg2+損失（EDTA＞1mM即可抑制酶活性），這一抑制可通過添加MgCl2來解除。 | |||||||||||||||||||||||||||
問9：如何去除體系中的Benzonase核酸酶？ 答9：通過以下幾種下游的操作方法來去去除，比如澄清用的深度過濾法；TFF (Tangential ?ow filtration)；色譜純化（IEX, SEC, HIC）等。 | |||||||||||||||||||||||||||
問10：Benzonase核酸酶與蛋白酶抑制劑cocktail兼容嗎？ 答10：兼容。但需注意很多商業(yè)化的蛋白酶cocktails含有EDTA。＞1mM EDTA會抑制酶活性。 | |||||||||||||||||||||||||||
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅能用作科研用途，不可他用。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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